作者keiny (lav dolce vita(分生所))
看板Biotech
标题[问题] 请问有人做过 in vitro trascription & translation 吗?
时间Wed Jan 17 03:03:44 2007
Q1: 有大大做过这个实验吗?
我想请教其中的细节
Q2: 还是有其他更适合的方法
(看unmodified form proetin 之 expression 情形)
{前情概要}
小弟正在做这个实验(In vitro transcription & translation)中
http://www.promega.com/pnotes/60/6079_07/promega.html
目的: 要看在很少modification的环境下
我的protein的表现情形
(注) 我是用S35-Met label 的
我要表现的DNA (约1800bp) construct在pet15b的vector中
因为它有T7 promoter
手边又刚好有
http://www.genomex.com/vector_maps/pet15bm.pdf
{惨状}
不过我照着protocol做了几次 压了几次片子
都没有看到我想看的protein !!
只有一些background band(compare with control:没有放入任何DNA的Reaction !!)
恳请诸君给予建议
感激不尽~~~~
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◆ From: 140.109.32.9
1F：推 nightcatman:我用Roche的做过,按照说明书一次成功,不过Roche的很贵 01/17 08:07
2F：推 lolity:Kit里面应该有提供control plasmid，先确定不是kit的问题。 01/17 09:08