※ 引述《MPGTR (GOOD)》之铭言： : 请问有人在做5'RACE吗 : 我是要做出full length : 但是我很难拉到最长的那一条mRNA,也就是+1拉 : 我做都有band, : 而且我有DNA的Seq, 所以我用DNA上的foward primer去看是否有更长的 : 事实证明有, 但我5'RACE的band却不是那麽长 : 有没有可以解决的方法, : 我是用termial transferase接上dT的方法 : 难道要挑clone挑到死也没有结果的埋头苦干吗 : 请高手帮我解答一下 : 谢谢!! 呃, 不好意思, 不太懂都有band是怎样的band? 是指 RT 的check吗? DNA的seq 是指 genomic DNA吗? 那不就可以预期 5'RACE应该获得的片段长度了? 我是觉得 genomic DNA的PCR就算比较长, 应该也不代表mRNA就会到那麽长吧? 不过以我们实验室利用terminal transferase做 RACE的话 会先确定 RNA 抽得好不好 (run gel check外, 还会用靠近5'端的 forward及reverse primer去check) 在进行terminal transferase reaction前,也会先浓缩 RT product 不知道会不会有所帮助......... --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.80.54