想请问板上使用过这类层析材料的前辈 我利用这个材料想分离叶绿体-ATP synthase中的gamma subunit 我看paper的配方各种buffer的组成如下: buffer A: 15mM NaH2PO4 1mM ATP 0.5mM MgCl2 2M Guanidine-HCl buffer B: 15mM NaH2PO4 buffer C: 200mM NaH2PO4 buffer D: 300mM NaH2PO4 2M Guanidine-HCl paper 内容提到说由buffer A 可以洗出alpha及beta subunits 利用buffer D可以洗出gamma subunit(我希望得到乾净的gamma) 可是经过多次的实验结果 在buffer A就已经将大部分的蛋白质都冲出来了 而在buffer D 所冲出来的是alpha beta 和gamma subunits 不过蛋白质浓度比由buffer A冲出来的来的低 我在想在buffer A就已经把大部分的蛋白质冲出来是不是因为加了Guanidine-HCl 破坏了蛋白质和gel的结合力 还是说流速太快(24cm/hr) 造成蛋白质来不及和gel结合就被冲出来了 我应该要如何改进才可以得到纯的gamma subunit 烦请板上有类似经验的前辈帮帮忙 谢谢你们 --

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