作者lucidol (台北-淡水)
看板Biotech
标题[问题] 抽取RNA相关问题
时间Sat Jan 27 02:05:45 2007
各位前被大大您们好
之前实验室都是专门做关於E. coli与yeastDNA以及蛋白质表现方面.
但是突然老师要我做抽取RNA来做PCR
目前面临问题是.因为实验室里学长姊没做过RNA相关实验.
老师也不是很清楚.问东问西找资料然後叫我找资料跟他讨论
讨论之後老师他本人解释很怪很疑惑也很不确定.所以想请问有过RNA的前辈解惑
我想问的问题是:
1.实验室没专门做RNA的实验桌及仪器(ex.离心机).老师跟我说用水擦一擦再用70 %ETOH
清理过就可以操作RNA实验.这样的做法可行与否?
2.关於Tip,实验室没有新的tip盒,只有旧的.老师叫我把他一样用水跟酒精交互清洗.
就可以插tip去灭菌.赃赃的tip盒用这样处理方式可以把RNase除去吗?(实验室的Tip
是没有棉花滤膜那一种)
3.关於pipette,老师也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清洁,但我是想问用很久的
pipette内部空腔不是都赃赃的容易污染?要怎麽清理内部减少RNase污染?用棉花
棒清在直接高压高温灭菌?
4.操作过程中所使用的药品,是不是都需要在RNase-Free场所配置?配置药品所需用到水
应该是拿DEPC-ddw吧?老师是跟我说像是phenol/chloroform拿抽DNA的那个来用就可以,
这样ok吗?我很质疑他说的这一句
5.老师叫我用bead及acid phenol来做RNA extraction,那bead要怎麽处理去污染阿?
用来装的eppendorf要怎麽做预处理去除RNase?是直接灭菌??
6.实验过程中可能会碰到冰箱跟离心机,我戴手套然後再碰这两个器材会不会因为其
他人没戴手套就这样把RNase附着到手套上面进而污染我的东西?(实验室没专门用
RNA的冰箱,离心机以及场所)
目前我只想到一些疑问,请各位前辈不令指教 谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.132.182.103
1F：推 ROKEE:我会建议你实际去有在RNA操作的实验室走一趟,这样比较快上手 01/27 05:30
2F：推 enisx:先把版上关於"RNA" 的讨论文章全看过一遍,再翻翻书应该会有 01/27 09:13
3F：→ enisx:点心得, 正式要作前,找个有经验的人带你或是如楼上说的,去 01/27 09:14
4F：→ enisx:平常有在抽RNA的lab见习一下吧! 01/27 09:15
5F：推 Nicoleching:嗯 只能说 我从来没做过以上去污染的动作...抽的出来ꨠ 01/27 13:21
6F：→ Nicoleching:就是抽的出来... 顶多灭灭菌带口罩... 01/27 13:22
7F：推 AcSn:我们lab也没有专门做RNA但要抽RNA前就都灭菌50分一直都ok 01/27 13:41
8F：→ AcSn:最多水会经过DEPC处理过灭菌再用罗~ 01/27 13:43
9F：→ ceci:灭菌机的高温 确实可以去除RNase活性 01/27 22:05
10F：→ ceci:小心处理Eppendorf外壁上的RNase也不会进到里面 毕竟它有盖子 01/27 22:06