※ 引述《lucidol (台北-淡水)》之铭言： : 各位前被大大您们好 : 之前实验室都是专门做关於E. coli与yeastDNA以及蛋白质表现方面. : 但是突然老师要我做抽取RNA来做PCR : 目前面临问题是.因为实验室里学长姊没做过RNA相关实验. : 老师也不是很清楚.问东问西找资料然後叫我找资料跟他讨论 : 讨论之後老师他本人解释很怪很疑惑也很不确定.所以想请问有过RNA的前辈解惑 : 我想问的问题是: : 1.实验室没专门做RNA的实验桌及仪器(ex.离心机).老师跟我说用水擦一擦再用70 %ETOH : 清理过就可以操作RNA实验.这样的做法可行与否? 我也是抽yeast的RNA 抽的时候戴口罩和手套 尽量少讲话和摸来摸去的 实验桌和仪器我们也没有分开 用的时候把桌子整理乾净 可以贴一张乾净的防污纸 或是用70％酒精擦一下 : 2.关於Tip,实验室没有新的tip盒,只有旧的.老师叫我把他一样用水跟酒精交互清洗. : 就可以插tip去灭菌.赃赃的tip盒用这样处理方式可以把RNase除去吗?(实验室的Tip : 是没有棉花滤膜那一种) 建议你用乾净一点的tip盒 旧的也没办法 但是尽量乾净罗 插tip的时候用火焰消毒过的镊子插 不要碰到tip尖端 然後灭菌至少40分钟 : 3.关於pipette,老师也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清洁,但我是想问用很久的 : pipette内部空腔不是都赃赃的容易污染?要怎麽清理内部减少RNase污染?用棉花 : 棒清在直接高压高温灭菌? 基本上pipette内部应该一年校正的时候会帮你做内部清洁 所以如果操作没有问题的话还好啦 用酒精擦拭一下不太会有污染的问题 : 4.操作过程中所使用的药品,是不是都需要在RNase-Free场所配置?配置药品所需用到水 : 应该是拿DEPC-ddw吧?老师是跟我说像是phenol/chloroform拿抽DNA的那个来用就可以, : 这样ok吗?我很质疑他说的这一句 配置的过程是不需要在RNase-free的场所配 但所有需要用的水通常都是DEPC水 有些可以配完再加DEPC处理再灭菌 另外 我们实验室是用TRIZOL抽RNA 如果你是用phenol-chloroform的话 phenol的pH值和DNA用的不一样喔 chloroform的话是一样的 : 5.老师叫我用bead及acid phenol来做RNA extraction,那bead要怎麽处理去污染阿? : 用来装的eppendorf要怎麽做预处理去除RNase?是直接灭菌?? 我们实验室的beads有分两种 大(3mm)的是用清洁剂洗乾净後泡0.2N NaOH 20' 然後再用一次水洗净 二次水润洗 烘乾之後灭菌 小(0.2mm)的是买处理好的 所以直接灭菌就好 至於eppendorf和tip就是用全新未开封的 装的容器尽量也是新的乾净的 如果你怕的话 你也可以先用NaOH处理过 但要记得NaOH一定要洗乾净 其他所有在RNA实验要用到的东西 比如说电泳槽之类的 也要先用NaOH处理过喔 也可以用3%双氧水处理10' : 6.实验过程中可能会碰到冰箱跟离心机,我戴手套然後再碰这两个器材会不会因为其 : 他人没戴手套就这样把RNase附着到手套上面进而污染我的东西?(实验室没专门用 : RNA的冰箱,离心机以及场所) 你可以换手套 换下来的手套可以留着给DNA实验用 这样也不会太浪费 : 目前我只想到一些疑问,请各位前辈不令指教 谢谢 -- 欢迎参观我的瓜瓜小舖 http://www.wretch.cc/album/lindayeh2 里头有低调奢华风的耳环 还有复古风的耳环、发饰 还有还有 今年最in的毛线发夹 跟永远不会褪流行的水钻系列耳环及发饰喔 欢迎大家告诉大家 一定要来瓜瓜小舖光顾一下喔^^ 所有东西都是限量供应 卖完就没了 先抢先赢～ 大家要把握机会喔^^ --

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