作者ROKEE ( Beanazai)
看板Biotech
标题Re: [求救] native gel(跑protein用)
时间Tue Feb 6 13:26:39 2007
※ 引述《philesazumi (苦闷阿)》之铭言：
: 我家 acrylamide PAGE是用 biorad的mini protean 3 cell
: 这个系统，厚片玻璃是8cm X 10cm，我要看protein native form的大小
您的胶片厚度是? 0.75? 1.0? 1.5? (mm)
小弟我有点好奇，请问你们家有可以看native form分子量的marker吗?
还是说用另外一个已知分子量的蛋白当比较基准点?
: 所以不能用SDS，我有用google收寻过，有找到两个recipe
: 其中一个和current protocol内的一样，但这两个试的结果，
: 都因为过热而玻璃破掉（我有放在冰箱里面跑，电压也才30V，跑O/N）
: 求适合我这个系统的recipe以及protocol
我的经验是整个tank都放在大冰保里，里面灌满冰块(记得要死命压实)
不含SDS的running buffer当然是用先冰过啦
跑的时间大概是一般跑denature form的至少2.5倍以上
基本上我用的 PAGE 跑胶系统跟你一样，所以应该可以做出来 :DDDD
不过您的情况是热到玻璃都「烤」破，小弟我有点难以想像耶
(OS:tank里就跟温泉一样冒烟?那tank怎麽没先融掉?)
: 用NT$1000元整跟你买...........................紧急
: p.s. 要确定能用我才出钱...我可以假日到你的地方试能不能用
用PAGE看native form分子量其实准确度并不是很好
(当然是要看您的目的和用途啦)
打个gel filtration不就省了这些麻烦?
至少玻璃不会破 XDDDD
(原厂玻璃 - 厚：$500/片，薄：$220/片)
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◆ From: 140.120.213.101
1F：→ ROKEE:补充一下,native PAGE不用做stacking gel 02/06 13:27
2F：推 freshing:native gel 似乎也有人在做stacking ～ 供参考 :) 02/07 07:38