作者philesazumi (苦闷阿)
看板Biotech
标题Re: [求救] cloning
时间Sun Feb 11 15:12:05 2007
※ 引述《willie0208 (我不要现在就出征....)》之铭言：
: 我有一段约4kb的vector要跟一段约2.4kb的insert接起来
: 两个plasmid两端的切位分别用NotI和NcoI照理说应该很好接
: 但是我做了两三个月了~还没做出来~
: 问题到底出在那~涂盘後我的control组没长(有加ligase怕自接)
: test组长个两三颗~挑出来抽DNA後在去用相同的酵素切
: 却跟原本vector的DNA一样大~
: 到底是什麽原因???有大大可以救我吗??
1. 你如何判断insert确实有切？
2. insert如何来的？
3. 有几个control，两个吗？（有切，没加ligase;有切，有加ligase）
4. 最後用相同的酵素切，如果你是要接入 MCS site
当然跟原本的vector差不多一样大阿
你要看有没两条band吧（4kb & 2.4kb）！！！
5. 换不同切位，差异性大的（假设primer设计没问题的话）
6. 先做TA，再sub- clon到你要的vector
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.141
1F：推 Adler:insert已经接到TA vector上,再从plasmid上切insert 02/12 20:19
2F：→ Adler:plasmid用的浓度很高,切完後有确实在lader 100b.p.附近看见 02/12 20:21
3F：推 Adler:我最後是用PCR check 出一段约1500b.p.大小的片段 02/12 20:34
4F：→ Adler:谢谢你的回答~^^ 02/12 20:40
5F：推 Adler:ㄜ..回错了...@@不过还是谢谢 02/12 21:02