作者aswen ( )
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於cloning
时间Sun Feb 11 17:37:54 2007
※ 引述《philesazumi (苦闷阿)》之铭言：
: ※ 引述《Adler (Adler)》之铭言：
: : 我想要将一段只有50初b.p.的tag
: : 接到一个约5kb的vector上
: : 想要请问一下 有没有人做过类似的实验
: : 可以告诉我insert与vector间的molar ratio大概是多少
: : 我已经试过许多比例了...@@
: : 谢谢大家
: 大小太过悬殊，没有比较容易接，
: 而且也不容易跑胶看有没接上
: 可以先跟小一点（几百bp）的先接完
: 再接到vector上
: (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector
: molar ratio (3:1或6：1) = ng of insert
: vector的量不用太多，molar ratio这两个比例一直做得很好，供你参考
我之前做过也是将一段约50 bp的insert接到约5kb的vector上
试了很多不同比例後
觉得约5:1~10:1都可以
但重点是 把所有长出来的clone都挑来做 PCR (数量不会多到上百个)
一定可以找到有ligation的
(我用的是 Invitrogen Zero blunt TOPO cloning kit)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.222.3.155
1F：推 philesazumi:colony...株落 02/11 18:40
2F：推 turtle24:嗯..每个colony可以算是一个single clone吧?? 02/11 19:07
3F：推 tin0101:是single clone没错.我用会没接近去就会自杀的vector.好用 02/11 21:32
4F：→ tin0101:只要有长的colony就是有接进去的.命中率大约8-9成 02/11 21:34
5F：推 philesazumi:我老板说要用blue-white，只因为会自杀的他没做过 02/11 22:23
6F：→ Adler:谢谢你~我会再试试看^^ 02/12 20:39