作者pan7353 (要变成自己喜欢的模样)
看板Biotech
标题[问题] colony PCR有band 但定序结果错误
时间Tue Feb 27 09:12:55 2007
我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的)
放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接)
蓝白筛选了六个 colony 做 PCR 结果都有还算 specific 的片段
挑了四个 colony 送定序後 结果四个都没有 insert DNA 的序列
甚至连 当初做 colony PCR 的 primer 序列都没有
请问可能发生什麽情况?我是要重做一次吗?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.56
1F：推 alaric:定序的primer用谁的? 02/27 12:26
2F：→ alaric:另外, 最好是送plamid去定序 02/27 12:27
3F：推 oooya:如果用vector的primer可能是正反接的问题把序列反转试试看罗 02/27 15:08
4F：→ pan7353:定序的primer是vector上的M13,另外 我已经找过反转互补 03/01 14:17
5F：→ pan7353:共四种可能性 但都没有找到 03/01 14:17
6F：推 elgase:可能是你P到的东西本来就不是你想要的specific product 03/05 19:53
7F：→ elgase:我们家有遇过这种情况 03/05 19:53
8F：→ elgase:不如乾脆先直接把PCR product纯化後送定序 03/05 19:54