作者raining0924 (..N )
看板Biotech
标题[问题]有关real-time PCR 的结果?
时间Thu Mar 1 23:08:53 2007
最近在作 real-time PCR 的实验
在RT-PCR时,有先跑胶,确定确实有产物(且只有一条band)
但在跑real-time PCR时, 却发现melting curve 有两个peak ..
我是用lightcycler 机器, 一开始以为是annealing Tm 不够高..
但後来调至52度,仍有此现象....
且跑胶结果发现两个peak的产物大小为(200bp and 400bp).
想请教板上各位大大...
这是什麽原因呢?? 是primer设计不好吗?..还是??
最近实验数据没一个能交差的..请大家救救我吧...先谢过
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.146
1F：推 huangsw:如果有两个产物 melting curve也不同 可以考虑非特异性 03/01 23:53
2F：推 raining0924:什麽的非特异性?不懂耶... 03/02 00:01
3F：推 huangsw:简单的说 primer夹到non-target sequence 03/02 00:02
4F：→ aggaci:52度 蛮低的，我都用60度 03/02 00:16
5F：推 mandible:请换primer~~有primer dimer的情形! 03/02 10:14
6F：→ mandible:注意一下NTC的Tm值~跟产物是否相当?有的话可能dna conta! 03/02 10:15