作者newivan (.......................)
看板Biotech
标题Re: [问题]有 total cell lysate的浓缩法吗?
时间Fri Mar 2 17:39:40 2007
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言：
: ※ 引述《[email protected] (逃避不是办法阿)》之铭言：
: > 大家好
: > 最近在一直在作western,
: > 观察的材料是total cell protein
: > 因为所使用的抗体很贵,所以都用小片的电泳胶
: > 但是因为想观察的蛋白质需要用到较多的质量(ug)
: > 又因为sample数量多
: > 所以每次能够load的体积有限,且分多次load跑出来的结果也比较容易不美丽
: > 除了在收蛋白质时,使用较少的lysis buffer
: > 有没有方法可以浓缩已收下的蛋白质
: > 因为用少量的lysis buffer操作时对我而言较困难
: > 所以希望知道是否有事後浓缩蛋白质的方法
: > 先在此谢谢大家!
: 除了前面提过的透析, ultra filter 以外
: 冷冻乾燥也是一个方法
: 不过一片胶片能容纳的总蛋白质也是有限的
: 超级高浓度的 lysate 很难跑得好
: 我倒是觉得可以用厚片的胶片（用厚的 spacer）
可以试试 TCA 沉淀 or Acetone 沉淀来浓缩
不过蛋白浓度太高会造成 gel smear
不然就多养几盘细胞,一起粹取,增加浓度.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.156
1F：推 threestars:不建议用TCA 之前我用过 PH值会改变太多 跑起来很丑 03/02 19:39