※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (逃避不是办法阿)》之铭言： : > 大家好 : > 最近在一直在作western, : > 观察的材料是total cell protein : > 因为所使用的抗体很贵,所以都用小片的电泳胶 : > 但是因为想观察的蛋白质需要用到较多的质量(ug) : > 又因为sample数量多 : > 所以每次能够load的体积有限,且分多次load跑出来的结果也比较容易不美丽 : > 除了在收蛋白质时,使用较少的lysis buffer : > 有没有方法可以浓缩已收下的蛋白质 : > 因为用少量的lysis buffer操作时对我而言较困难 : > 所以希望知道是否有事後浓缩蛋白质的方法 : > 先在此谢谢大家! : 除了前面提过的透析, ultra filter 以外 : 冷冻乾燥也是一个方法 : 不过一片胶片能容纳的总蛋白质也是有限的 : 超级高浓度的 lysate 很难跑得好 : 我倒是觉得可以用厚片的胶片（用厚的 spacer） 冷冻乾燥的方法我觉得有点冒险~ 厚的胶是一种方法~ 不过 我会建议你~ 不管怎样浓缩 gel的capacity也是有极限的 超过它的极限 讯号会很难band band分明~ 如果你浓缩tatal lysate 其他不是目标的蛋白也相对提高 做western去影响讯号的可能性也提高 所以我会建议 也许你在破细胞的过程就先粗略做分离 譬如说 分细胞质 核 膜 当然 也要看你的实验想看的是什麽~ 是否适合这样做~ 可以参考看看罗~ --

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