我这两个月在做insitu DQ-gelatin zymography的实验，但是遇到种种的困难， 第一关於冷冻切片的厚度，通常一般冷切的厚度大概是20~40um这麽厚，但是根据paper 指出他们在切的时候是用10um，这是一个难度很高的事，因为基本上所取出来的脑组织 只用利用PBS灌流过，并没有经过脱水和固定的步骤，因此在切片的时候组织非常容易 裂开或是破损，这个问题後来经过我的练习之後，仍然无法克服，但是後来我将切片的厚 度改为20um之後，就没有这个问题了 第二就是关於DQ-gelatin的特性，基本上MMP会分解细胞外基质（也就是gelatin）所以这 个实验就是将这个染剂（含有gelatin）用特定的buffer稀释之後加在组织上面，放在37度之下overnight， 之後在萤光显微镜之下利用495nm波长的光线激发会发出绿色萤光，所以萤光的部份就是 MMP所在的位置，但是在paper的图上即使没有MMP表现的位置，也会有background的颜色， 可是我在做的时候并不明显，所以不知道是什麽原因？ 第三个问题是，当gelatin被分解後，发出萤光的peptide会不会留在MMP所在的位置？ 因为在使用这个染剂的时候是在水溶液的状况之下，所以不清楚被分解下来的peptide （就是会发萤光的部份）会不会留在原本的位置？还是会漂来漂去？ 拜托各位罗！！有经验的人请帮帮忙吧！！ 感激不尽～～ --

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