小妹很久没有做了 最近开始做 要做的是cKit (RTK), AKT and ERK 我使用的lysis buffer 之前都没有问题 最近不知道怎麽好像出了问题 我在二月初有做一个sample as positive control 我收细胞wash 之後用lysis buffer 4C shake 1 hr (浓度7 ug/ul) 那个sample所有的东西都做的出来 可是过了一个礼拜 我做同一个实验 不过开始做treatment 不过因为想要放100ug total protein per lane 所以我放非常少的lysis buffer 而且改成冰上15 分钟 4C离心十五分钟 蛋白浓度在14 ug/ul左右 我用2x sample buffer loading dye跑gel 可是很怪的是 我load一样的量 我第一次做的control(我拿来当western control) 似乎比我之後实验组中的control(无treat)的高很多 也就是整个phospho-protein 强度 再我某个时期之後做的蛋白都偏低 但是我的total protein是相同的 请问是因为我clear不乾净吗?? 我收的时候有觉得有白白的东西在上液体 所以很多debrid都被我一起收下来了?? 导致蛋白浓度根本是错的?? 还是我蛋白浓度太高了?? 所以黏在一起 可是我有用95C 10 min or 我的phosphase inhibitor失效了?? 埃 我真的不知道问题在哪里 请各方高手替小妹指点迷津阿..... --

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