作者Porkcan (Threatening)
看板Biotech
标题[问题] Inverse PCR (iPCR)
时间Sun Mar 11 23:33:59 2007
第一次在这里发问
如果不妥之处 请多指教
我最近在找一段基因的sequence
一开始先用其他物种相同基因conserved domain的sequence设计出degerate primer
用这个degenerate primer可以夹出一段跟conserved domain相似的片段
之後再利用这个片段的序列来设计iPCR的primer往外扩增
我一开始是用RT的方式得到cDNA
为了要把cDNA的头尾相接成一个circular form的plasmid
就用restriction enzyme digestion cDNA
再把头尾ligation起来
因为cDNA是single strand 所以是不是要先合成double strand的cDNA之後
再用restriction enzyme来进行digestion
那double strand的cDNA要怎麽合成呢？
是用random primer进行一般的PCR吗？
Thanks!
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◆ From: 140.115.48.89
※ 编辑: Porkcan 来自: 140.115.48.89 (03/11 23:35)
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