作者yuiwei (谁要陪我吃麻辣状员)
看板Biotech
标题[求救] PCR和 TEMPLATE 量多少有关吗?..
时间Sat Oct 13 07:24:03 2007
看 说明书 是写 50ul 要< 1ug
我要的是 20ul 取约 150-200ng TEMPLATE 跑 PCR
换过新的 酵素後 就一直没跑出来...
用之前的酵素 可以有东西...
想一想 唯一影响的有可能就是 TEMPLATE 浓度
因为 ENZYME BUFFER DNTP 都是新的
难到是 PRIMER 有问题...??>
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呜呼！汝病吾不知时，汝殁吾不知日；生不能相养以共居，殁不得抚汝以尽哀；敛不凭其
棺，窆不临其穴。吾行负神明，而使汝夭；不孝不慈，而不得与汝相养以生，相守以死。
一在天之涯，一在地之角，生而影不与吾形相依，死而魂不与吾梦相接。吾实为之，其又
何尤！彼苍者天，曷其有极！自今已往，吾其无意於人世矣！当求数顷之田於伊颍之上，
以待余年，教吾子与汝子，幸其成；长吾女与汝女，待其嫁，如此而已。
呜呼！言有穷而情不可终，汝其知邪！其不知心也邪！呜呼哀哉！尚飨。
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◆ From: 61.217.247.132
1F：推 HIbaby:template是质体? 如果是质体 我通常只用 1到3ng去跑 10/13 08:54
2F：推 HIbaby:primer是 0.5到1mM 10/13 08:57
3F：推 allure1:template量不用给的这麽多 10/13 11:14
4F：推 allure1:我的template如果是质体 25ul放10-20 ng...也是放太多XD 10/13 11:16
5F：→ allure1:为什麽换了酵素出不来 会觉得是template浓度的问题? 10/13 11:18
6F：推 Highwind:换了酵素後,最大的问题绝对是温度,慢慢try吧 10/13 13:15
7F：推 medbiotec:做个gradient试试 10/13 17:03
8F：推 sGoat:提供一下酵素由哪个换到哪个..可能是敏感度改变.cycle要放大 10/14 00:25
9F：→ sGoat:还有buffer跟酵素是一套一起来的吗...混用会有很多问题... 10/14 00:29