如果是一般的immunostain 我们做的方式大概是: 例如使用贴附性的细胞 1. 准备3cm culture dish (或是12well盘也差不多只要可以容cover slide即可) 和盖玻片cover slide (小小正方形那种) 2.在culture laminar flow 无菌操作台中 将一片cover slide 放入 一个dish或well中 3. 用100%EtOH wash 一次 即加入稍微冲洗 再吸出 4.在laminar flow 中风乾 及照UV 可放数小时或隔夜 5.将你要观察的细胞 seeding种入 即加在已准备好的dish/slide上面 如贴附性细胞 培养隔夜 让其贴在slide上面 6.将贴附好的细胞 拿出 吸掉medium 小心不要吸得太乾 避免细胞变形 7.加入固定buffer 可以参考paper 选用 我们是用3.7% formaldehyde in PBS or TBS/EDTA 此步骤可以放15min~数小时 8.吸掉固定buffer 加入permeablization buffer 将细胞打洞用 静置1 min 3.7% formaldehyde 2% Triton-X 100 in PBS or TBS/EDTA 9. 吸掉buffer 加入2% albumin in PBS or TBS/EDTA (如Western blocking的意思) 这步骤可放4度C冰箱 隔夜 注意不能让细胞乾掉 到此 细胞算是处理好准备染色 10.吸乾buffer 加入你要染色的抗体 就像Western blot染1抗 先将抗体加入 2% albumin in PBS or TBS/EDTA 再均分到不同dish中 可以放4度C 4~5小时 每个小时可以拿出来稍微摇晃 注意不要乾掉 11.可用PBS or TBS/EDTA wash 3次 (例如加入1~2ml 稍微轻轻摇晃再吸出 这样为一次wash) 12. 可依step 10.方式加入2抗 室温下 1hr 大概每隔15~20分钟轻轻摇晃 13. 再wash 1~2次 如要染细胞核 可在此步骤中 加入1~2ul DAPI 静置1~3分钟 再wash 1~2次 14.准备镊子 和针头 或是方便你挑起 cover slide的工具 最好是乾净的或用酒精清洁过 准备 载玻片 并标示清楚 15.用pipet 滴 mounting solution 约30~40ul (每一个slide 大概需要的量) 用针头挑起染色好的slide 夹起cover slide反向盖在 mountiing solution上面 __________________ cover slide ///////////////// 细胞 _______mounting solution____ 载玻片 16.放37度C 风乾1~2hr 就可以用显微镜看了 这样应该可以对immunostain有点概念吧 希望有帮助搂 -- 我站在靠近天堂的顶端　张开手全部释放 用月光取暖　给自己力量　 才发现关於梦的答案 一直在自己手上 只有自己能　让自己发光 --

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