作者Nox4156 (人真好!)
看板Biotech
标题[求救]请问一下double digstion的问题! Orz
时间Wed Oct 24 19:12:42 2007
各位大家好! 我有一个Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 处理
但是NEB的Buffer推荐的是buffer 2，然後切出来後竟然会形成很多bands的情形出现!
但是後来我改用 EcoRI 的专用buffer切後一样会切出很多条bands。
第一次酵素加 0.7μl 最後体积 50 μl处理3hr，
第二次酵素加 0.3μl 最後体积 20 μl处理overnight。
请问条件会有差吗? (但是结果都切的乱七八糟!)
但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 处理同样的基因和vector切都没问题耶~
(用的是EcoRI 的专用buffer)
谢谢各位了!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.196
1F：推 HIbaby:应该没有必要切那麽久吧 2hr就可以了 10/24 20:08
2F：推 HIbaby:如果你加的东西没灭菌 可能会有影响 10/24 20:10
3F：推 jsi:可能是因为EcoRI作用太久产生star activity了 10/24 20:25
4F：推 wensing:问一下! 一般是切多久？ 若不会有乱切情况发生时。 10/25 00:41
5F：→ borhen:不建议EcoRI切太久 10/25 01:58
6F：推 jsi:可参考该酵素的使用说明书 应该都会有建议的作用温度与时间 10/25 21:18
7F：→ jsi:我使用EcoRI通常不会作用超过一小时 37℃ 10/25 21:22
8F：→ jsi:如果同时使用两种酵素切的效果不好 可考虑先切完一种酵素後 10/25 21:23
9F：→ jsi:再用另一种酵素切 10/25 21:24