作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
标题Re: [求救]请问一下double digstion的问题! Orz
时间Thu Oct 25 10:47:12 2007
※ 引述《Nox4156 (人真好!)》之铭言：
: 各位大家好! 我有一个Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 处理
: 但是NEB的Buffer推荐的是buffer 2，然後切出来後竟然会形成很多bands的情形出现!
: 但是後来我改用 EcoRI 的专用buffer切後一样会切出很多条bands。
: 第一次酵素加 0.7μl 最後体积 50 μl处理3hr，
: 第二次酵素加 0.3μl 最後体积 20 μl处理overnight。
: 请问条件会有差吗? (但是结果都切的乱七八糟!)
: 但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 处理同样的基因和vector切都没问题耶~
: (用的是EcoRI 的专用buffer)
: 谢谢各位了!
你可以试试sequential切...先给XbaI, heat inactivation後再加入EcoRI
如果还是不行....
建议你换一管新的再试试.....XbaI,SpeI都是很难搞的restriction enzyme
很多怪现象会出现尤其是作double digection....
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