作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
标题Re: [求救] PCR,以前做的出来,现在做不出来了?
时间Thu Oct 25 10:50:28 2007
※ 引述《yumei (爱自己最重要)》之铭言：
: 请教版上的PCR高手们,
: 我目前做的题目是关於细菌的基因,
: 我做的是阴性菌,目前在检测细菌中是否带有特定的基因,
: 这个实验在今年二月做过一部份,结果良好,一切都没问题,
: 因为之後收到更多的菌株,因此在九月时又重新进行此实验
: 结果非常惨,再也跑不出来了!
: 连之前二月做的阳性菌株,现在也无法跑出我要的产物
: 原先怀疑是PCR的问题
: 所以目前试过3家dNTP,4家Taq,
: 调整过镁离子浓渡由1.5mM试到2.5mM,结果连水都出现伪阳性
: 改变annealing的温度下降2-4度
: 都无法再度amplify出正确产物,
: 後来又怀疑是否DNA有问题,
: 又重抽DNA两三次
: (使用过phenol/chloroform/Isoamyl Alcohol的方法也试了用kit抽DNA)
: 还是没办法Orz
: 目前还没试的,只剩下加DMSO了
: (等会就知道结果了T_T)
: 可是我二月时不加DMSO也可以跑出来呀~~~
: 有人可以再给我不同的建议吗?
: 试了快两个月了,再做不出来,我真的可以不用玩了Q_Q
听你的叙述....我觉得是primer的问题....你当初有分装嘛？
建议你再订一次新的primer....稀释後分装...冻在-20度
一出现问题就换一管
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