※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之铭言： : ※ 引述《Nox4156 (人真好!)》之铭言： : : 各位大家好! 我有一个Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 处理 : : 但是NEB的Buffer推荐的是buffer 2，然後切出来後竟然会形成很多bands的情形出现! : : 但是後来我改用 EcoRI 的专用buffer切後一样会切出很多条bands。 : : 第一次酵素加 0.7μl 最後体积 50 μl处理3hr， : : 第二次酵素加 0.3μl 最後体积 20 μl处理overnight。 请参考一下 酵素附的 活性 每瓶都会和你说 是几U的酵素 要切多久 基本上和你加入的DNA 和酵素的活性有关 : : 请问条件会有差吗? (但是结果都切的乱七八糟!) : : 但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 处理同样的基因和vector切都没问题耶~ XhoI 和 EcoRI 要用 double digestion 的确是用 EcoRI buffer : : (用的是EcoRI 的专用buffer) : : 谢谢各位了! : 你可以试试sequential切...先给XbaI, heat inactivation後再加入EcoRI : 如果还是不行.... : 建议你换一管新的再试试.....XbaI,SpeI都是很难搞的restriction enzyme : 很多怪现象会出现尤其是作double digection.... XbaI 和 EcoRI 用buffer 2 + BSA 试试看 也可以直接用 上面的方法 也是可以的 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.115 ※ 编辑: sunorange 来自: 163.15.174.115 (10/25 18:43)