作者bluecsky (我要蓝蓝淡淡的天空)
看板Biotech
标题[求救] western的问题
时间Sun Oct 28 16:49:32 2007
请问western blot中secondary antibody使用过多
会造成许多的bnad吗?
因为我是第一次用这个secondary antibody(sigma的anti-rabbit IgG HRP)
一时找不到手册又很赶的情形下..
不加思索的使用1:10000的稀释下去做...
结果後来才想到网路上就能找了= =
结果说明手册说建议1:160000...哇靠..整整差了10倍
冲片出来的结果也很怪
好像..band有点多..
(不过这次用的primary antibody..lab中学长没有使用成功过..也就是用了没有band出来)
我还满害怕我的结果会不会是因为我secondary antibody过多造成的...
还有..做回来的antibody的specific都大概会是怎麽样..
因为之前大多做的是直接买的(GST..His-tag等)
这次做的是由前人纯化的protein去打兔子出来的
拿到是一整管类似血的东西(应该是血吧..)
这样做的specific会不会有影响?
还有..要是我真的secondary antibody用太多
除了重做以外还有救吗= =..
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.57.139
1F：推 HCCY:你的control呢? 10/28 18:08
2F：推 driws:purify过的抗体会比较专一 认到的杂band比较少 10/29 00:41
3F：→ driws:二抗用太多也是会增加多余background的机会 10/29 00:43