作者choyalove (我们说好了唷~)
看板Biotech
标题Re: [求救] 药物颜色对 MTT 吸光值的影响
时间Mon Oct 29 00:23:23 2007
: 我有点好奇你们用的是什麽药说
: 还有您的DATA呈现什麽样的状态阿
: 为何会让您觉得OD值有受影响
: 我有点好奇，说不定我们也有类似的情况但是我们没有发现
: 我们实验室也有使用MTT侦测CPAE的增生
: 我们是先treat药物(中药)，将药物移除後用PBS wash
: 细胞是endothelial cell，会wash 2~3次後加入MTT
: 在加入MTT之前，先将MTT(溶於PBS)稀释成1/5，CPAE用MEM养，所以用MEN稀释
: 加入MTT後incubate 4个小时，移除MTT反应液
: 加入DMSO
: 测OD
: 这样的流程RUN了一年多都还满顺的
: 应该不会有问题吧^ ^||||||||||||||||||
我的样品是一般食药材 有食材或是中药
我的目的不是要毒杀我的细胞
而是看我样品能否提高细胞免於毒物的伤害
所以我一开始会先测试样品对细胞是否具有毒性
也藉此选出适合的作用浓度
我会怀疑 DATA 有问题
除了数据做出来虽然说没有毒性是很好
但是细胞存活率相对於 control 组飙到 200% 多
多少让我觉得有点怪怪的... = =
另外就是我在用 SF-DMEM 稀释样品到所需的作用浓度时候
发现几个本身颜色就很重的样品
他们再最高浓度时候 会让 medium 颜色变了
明显跟其他不一样
我本来也想移除样品之後用 PBS wash 来避免他们颜色影响
可是细胞是 PC12 本身不是贴很紧的细胞
所以我怕我一洗 细胞会损失掉更多 误差更大
我看之後考虑用 trypen blue 数算了...
虽然花的时间比较多 可是应该可以避免掉颜色这方面影响
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.195.40.238
1F：推 blence:如果你的药物会影响,那理论上应该有剂量随着数值的相关性 10/29 00:35
2F：→ blence:而且就算拿别的细胞应该也会相似结果,如果要下这结论前可能 10/29 00:37
3F：→ blence:要先确认这些步骤,不然你的推论可能有缺陷存在 10/29 00:40
4F：→ blence:另外,如果担心SF-DMEM变色,其实有phenol-red free的能使用 10/29 00:44
5F：推 Highwind:方法以达到目的最好.MTT快但没友直接数精准,如果时间不 10/29 00:49
6F：→ Highwind:是问题的话,另外也要注意药是否有氧化性,影响甚大 10/29 00:50