作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关double digestion先後顺序
时间Wed Nov 7 23:21:33 2007
※ 引述《leoblack (朋友看太重的猫)》之铭言：
: 如题
: 现在我想要作double digestion
: 所选用的RE分别是ApaI和XmaI
: 两个特性都是用buffer 4 + BSA
: 但问题来了
: ApaI作用时需要在25℃,如果在37℃,则half-life为30分钟
: 而XmaI作用所需温度为正常的37℃
: 所以我想问~有没有说先切温度高的再切温度低的这种建议?!
: (我是要2种RE分次切,并没有要同时加在一起切)
: 个人第一个直觉是想先切温度低的再切高的
: 这样incubator温度设定可以一路往上加,不用先加温再降温
: 好啦~我承认我真的有些龟毛^^"~
: 感谢了
我在想...如果ApaI是可以被加热inhibt的话那可以用它沏完後先加热
去活性 再加XmaI作用...另外我是觉得啦...如果是我的话
我会先切高温再沏低温..因为我想低温的enzyme可能会在高温环境下乱切
虽然她活不久但是还是有可能造成伤害...可能会让ligation不顺利...
祝你实验顺利唷:)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.55.220
1F：推 leoblack:感谢~我有查过ApaI在37度时活性是100%,只是halflife短^^" 11/08 13:31