作者babyfinerain (心香水)
看板Biotech
标题[求救] 我的western><~~~~~~~~
时间Thu Nov 15 22:53:29 2007
小妹的western已经一个月了....
押出来全部都是空白片@@.....
後来受不了了><
这礼拜把啥都试了....
60 ug sanple
膜上有蛋白~所以transfer没问题
以一抗 actin 为例 overnight 4度
二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小时
柏森的ECL 加了之後约15分钟路程...压片---> 空白
今天把ECL拿到暗房加
发现...是有band的....
加了ECL後...有很亮的band...但是过一下下就不见了
压片时也只有弱到快不见的的痕迹
为啥会这样呢????
这和我之前的条件都一样..但是之前压出来的片很漂亮
自从某次之後都在也压不出来了...全都是很乾净的空白片
参考板上说的...是不是2抗太浓??
但是之前作也是1:5000也很OK阿
请问各位先进~~~还有什麽原因呢???
之前用一样的条件都是在实验室加完ECL後去压片
因为等电梯所以约30分钟
但压出来还是很漂亮阿
而且都还是用弘晋ECL
但是最近是怎麽都做不出来....
我已经到了疑心疑鬼的地步了><~~~
呜~~~哪位好心人可以告诉我到底为什麽><~~~~~~~~~
上帝一定会非常保佑您的><~~~~~~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.164.13.203
1F：→ mournermind:我没做过鸦片~但我同学她之前一直失败的原因是因为显 11/15 23:02
2F：→ mournermind:影剂坏了还是另一个甚麽剂坏了都变黑了~~加油! 11/15 23:03
3F：推 blence:用柏森的,1,2抗都各稀释2~5倍以上,再lysate降低1倍,就好了 11/15 23:02
4F：→ blence:你应该是从SantaCruz换成millipore,才发生问题的？ 11/15 23:04
5F：推 nixo:有可能是太浓了，把ECL消耗光了。 11/16 00:45
6F：推 malakaki:太浓了~~你膜上是不是出现黄色的band 11/16 00:57
7F：推 meiosisLin:显影剂用多久了？.............. 11/16 08:26
8F：推 babyfinerain:不是ㄟ～我用SantaCruz的ECL仍然是压不出来 11/16 13:53
9F：→ babyfinerain:所以才换学姊用OK的伯森ECL试试看...可是还是压不出ꠠ 11/16 13:53
10F：→ babyfinerain:请问是指什麽东西太浓吗？？是一抗～还是二抗？？ 11/16 13:54
11F：推 t123401221:你二抗用1：3000试试看.HI两个小时就好 11/16 19:41
12F：推 kakaman:ECL有需要那麽久吗 不是几分钟就可以了 11/16 20:29
13F：推 konlon:我想你的protein amount过高 呈色剂呈色过久 11/21 18:41
14F：→ konlon:蛋白太多你才会看到类似烧焦的band 11/21 18:42