请问你是跑大片的吗?用到60ug/well 如果是小片的page，可能量太多了 而且我也觉得是ecl你加太久了 我也是用二三分钟就去压片了 不然ecl一下就眊光了 不然就是你的一抗可能坏了(可能没分装或反覆冷冻解冻之类的) 你实验室的人做的出来吗? 还是只有你的没做出来? 二抗太浓的话，你只会压出黑压压的一片，不会都是空白片 你的二抗是怎麽保存的呢?如果是空白片，您可能二抗反而要加浓一点吧 还有你的显影剂，是不是新鲜的，还是都是黑的了? 您是手洗还是用洗片机洗呀? ※ 引述《babyfinerain (心香水)》之铭言： : 小妹的western已经一个月了.... : 押出来全部都是空白片@@..... : 後来受不了了>< : 这礼拜把啥都试了.... : 60 ug sanple : 膜上有蛋白~所以transfer没问题 : 以一抗 actin 为例 overnight 4度 : 二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小时 : 柏森的ECL 加了之後约15分钟路程...压片---> 空白 : 今天把ECL拿到暗房加 : 发现...是有band的.... : 加了ECL後...有很亮的band...但是过一下下就不见了 : 压片时也只有弱到快不见的的痕迹 : 为啥会这样呢???? : 这和我之前的条件都一样..但是之前压出来的片很漂亮 : 自从某次之後都在也压不出来了...全都是很乾净的空白片 : 参考板上说的...是不是2抗太浓?? : 但是之前作也是1:5000也很OK阿 : 请问各位先进~~~还有什麽原因呢??? : 之前用一样的条件都是在实验室加完ECL後去压片 : 因为等电梯所以约30分钟 : 但压出来还是很漂亮阿 : 而且都还是用弘晋ECL : 但是最近是怎麽都做不出来.... : 我已经到了疑心疑鬼的地步了><~~~ : 呜~~~哪位好心人可以告诉我到底为什麽><~~~~~~~~~ : 上帝一定会非常保佑您的><~~~~~~ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 61.64.162.223