作者kvw (Je t'aime)
看板Biotech
标题[求救] 要做长片段的PCR
时间Thu Nov 29 11:58:42 2007
最近要夹一个片段
估计里面是有intron存在
因为用cDNA是可以夹出来
但是换成genomic DNA就不行了
跑完胶後乾乾净净 一点东西都没有
想说可能是片段太长了
有爬文看了一下 不过还是不太懂
如果将Taq换成Pfu可以改善吗?
我们家是用invitrogen的Taq DNA polymerase
还是我将extension时间拉长就可以了? 目前是设定 3 min
那dNTP的浓度要提高吗? 目前是2mM 5ul
希望大家可以帮我解答一下 拜托了谢谢
p.s大小预估是4kb 这样普通的Tag有能力做的出来吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.90.211
1F：推 HIbaby:如果太长, 我会做两条, 在把两条接起来 11/29 12:02
2F：推 nixo:也有专门作长片段的taq。或是多作几个primer组合确认一下。 11/29 12:22
※ 编辑: kvw 来自: 192.192.90.211 (11/29 13:25)
3F：推 HCCY:Pfu产量比Taq还差耶 可以用fusion pcr 11/29 13:32
4F：→ HCCY:最简单的还是如楼上所说 做两条接起来 11/29 13:33
5F：推 biologydream:我有夹过3K,用的是taq+pfu 1:1混合,并加DMSO增进产物 11/29 13:44
6F：推 konlon:pretreat with suitable restriction enzyme 11/29 19:15
7F：推 elderbear:我用过百力的blend taq作3.5kb...产量多又专一喔 11/30 12:23
8F：推 handoluslash:我之前经常作5K的片段用的是hotstart Taq 12/01 11:55
9F：→ handoluslash:也是加DMSO增加效率 不过浓度是2% 12/01 11:57