作者foureyes ()
看板Biotech
标题[求救] 接好的切不出小片段来
时间Fri Nov 30 15:01:42 2007
从九月开始就在作构筑质体的动作
老师要我用 PCR 夹出 insert 片段
clone 到 pET32c 上面後 transform 到大肠杆菌里面去做表现
我 transform 完後在 LA plate 上有长出菌落
我以为这样就表示有接到? 因为之前曾经长不出菌落过
然後挑菌落转养後抽质体确认
用与 digest 时相同的酵素 HindIII & NdeI 来切
37度C 反应 2小时15分钟
跑电泳却没有看到理论上一大一小的片段
(我的小片段应该是 500 bp 左右)
已经重复五六次了都没有看到小片段
请问这表示我根本从头到尾都没接到吗?
我看有人说用两种酵素的话要分一前一後处理
我是两种酵素一起加下去
会是这个原因所以切不出来吗?
还是有其他的问题?
先谢谢大家了(跪)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.173.217
1F：推 bluecsky:false positive... 11/30 15:56
2F：推 enisx:作一下colony PCR看大小是否正确,之後送定序或酵素切割确定 11/30 16:00
3F：推 littleable:建议Vector处理CIAP...这样可以避免self-ligation 12/01 07:49