※ 引述《ROKEE ( Beanazai)》之铭言： : ※ 引述《xmanxpower (188)》之铭言： : : 我是利用pPICZalphaC为载体以及SMD1168H为宿主 : : 我要表现蛋白酶 : : 问题一、 : : 我想问回溶到OD600=1是怎麽做的？？这一步骤 因为要换成不同碳源的 medium 从 glycerol 换成甲醇 没洗乾净的话对蛋白质表现的影响有多大就不得而知了 不过因为觉得每次测 OD 很麻烦 而且不停的调整浓度再取sample 测 OD 会增加污染的可能性 所以我的做法是改成测湿重 一开始先试好大约多少比例回溶的 OD 等於 1 之後就都秤湿重然後依比例回溶 准确度颇高 而且老实说 这个地方的OD也只是一个大概 反正最终目标是取得大量表现的蛋白质 加入甲醇量对蛋白质表现量的影响还比较大 如果情况允许的话 12小时加一次的效果会比较好 或者应该说 通常 24小时加 1% 效果可能不如 12 小时加 0.5% 因为甲醇浓度太高对 pichia 本身也不太好 不过没表现的话就是没表现 不会因为改一大堆生长条件就变成有表现 这是浪费半年得到的结论......... --

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