作者sinDog (凯)
看板Biotech
标题Re: [求救] Plasmid抽出来以後 不久後却消失了？
时间Mon Dec 3 22:39:53 2007
很简单 污染ㄌ
把所有要用的东西都灭过菌吧
有问题再来五楼找我 XD
※ 引述《njp13 (.....)》之铭言：
: 小弟最近在进行cloning
: 养完菌以後 作plasmid extraction
: 第一次
: 把抽出来的plasmid直接跑胶发现band很亮 浓度应该OK
: 接着把抽出来的plasmid切一刀
: 与空vector及之前insert正确size片段但有点突变的plasmid也切一刀之後比对大小
: 发现size也正确
: 接下来的应该就是送去定序
: 但是到定序商手上 他们测完OD发现我送的sample浓度太低
: 几乎跟水没两样
: 我想说那就再养一次再抽一次吧
: 第二次
: 我一样先跑胶
: band很亮
: 隔天测OD稀释20倍得到的值却只有0.0162 也就是说原始浓度只有 0.0162 μg/μl
: (老实说这样的值根本不可能出现前一天那麽亮的band)
: 不过我想应该定序商的机器还是可以读得到
: 再隔一天
: 定序商来电 一样 又是sample浓度太低
: 我发现我的plasmid浓度好像会衰退
: 不知道实验经验丰富的各位可以帮我想想为什麽有这样的状况发生吗？
: 感谢感谢
: ---
: 抱怨....
: 本身不是分生背景 硕一也不是作这方面的题目
: 因为老板要被fire才换老板换题目
: 现在硕二了 实验进度龟慢 又一直卡到阴
: 不是跟Novagen这种大公司买vector结果送来的一管空的eppendorf
: 里面什麽都没有(一只八千的eppendorf是镶金的吗？)
: 就是买到有问题的plasmid extraction kit
: column一直破 结果才承认QC有问题 送一堆新的column补偿
: 现在又遇到plasmid被鬼摸走的状况
: T＿T
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