作者Nikio (工作有够忙)
看板Biotech
标题[求救] FLAG抗体
时间Tue Dec 4 08:41:42 2007
我在做FLAG-tag的蛋白质实验
实验大致如下
实验组：有个PROTEIN带FLAG, whole cell lysate
control组：一样的细胞，不过没有PROTEIN带FLAG
先用FLAG affinity beads做IP
wash过7遍後拿BEADS去煮
之後做western
用的抗体是Sigma M2 monoclone antibody
很鸟
染出来一堆bands
连negative control也一堆(有用affinity column先抓耶@@)
有在GOOGLE查到国外论坛也很多人碰到相同问题
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/13665.html
有人碰到类似问题吗？要怎麽解决？感恩 ><
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.126.12.63
1F：推 blence:sigma M2的Ig浓度太高,不小心使用很容易就会这样 12/04 13:11
2F：推 leoblack:你的flag beads上面的Ab是不是也是mouse的?! 12/04 14:52
3F：→ leoblack:不晓得你的一堆band是不是heavy/light chain~ 12/04 14:53
4F：推 Nikio:flag beads上也是M2 abs, 老鼠的，我SAMPLE是人的细胞 12/04 23:20
5F：→ Nikio:heavy/light chain会有一堆吗@@ 不是只有两条喔 ><? 12/04 23:21
6F：推 konlon:请於煮sample时於sample中加入1-1.5ul之1M DTT 可改善 12/05 21:46
7F：→ konlon:因为IP及WB 1抗 同一Species之Ab所造成之heavy/light chain 12/05 21:47
8F：→ konlon:可以试试看 很好用 但若要看的蛋白不能是25 or 50kD 12/05 21:49
9F：→ Nikio:我实验不能用DTT耶(Orz) 12/10 22:05