※ 引述《Nikio (工作有够忙)》之铭言： : 我也在做膜蛋白的纯化实验 : 用的是古早方法....打破细胞後做超高速离心 : 最後离下来有点透明的就是membrane fraction了 我们也是用这种方法~~ 超高速离心是 120000g 60 min : 不过有个小问题： : 就是membrane fraction好像蛮难resuspense的耶 : 我用的lysis buffer是TBS+1% triton X-100，後来用到2%也有些溶不掉 : 请问版上有人做过类似实验吗？最後membrane fraction是用哪种东西溶掉的，感恩>< 不知道你用 lysis buffer resuspension 都让它做用多久?? 我们家是用 Dodecyl-beta-maltoside(DDM) 或是 Octylglucoside(OG) (比较常用还是 DDM 因为它的 CMC 比较小~~) resuspension membrane 以後放在 shaker 上摇 overnight 隔天再用 50000g 30 min 去除沉淀 理论上沉淀就是 lipid 或是一些没有被 suspension 出来的膜蛋白 不过我觉得关键还是在於使用的 detergent 的浓度是不是足够了~~ 然後之前有 sales 知道我们家有在做膜蛋白 然後就推荐我们用 PIERCE 的 kit http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=06010422 可是因为我们家的系统不适用 所以就放弃了 (当然价格也是一个考量啦~) 和大家分享~~ 不知道是不是合适~~ : ※ 引述《belady (白衣天使黑心肝)》之铭言： : : 目前我正在作这方面的实验 : : 但材料是原核生物Gram negative bacteria : : 方法是先破菌（ultrasonication, fresh pression我都做过） : : 所得的crude protein在利用 ultracentrifuge进行萃取 : : 所得产物及为膜蛋白（进行SDS page後可见许多蛋白质） : : 给你参考一下 不知道你合不合用 -- 寒风中的雪女无助的站着... 望着对自己舍命相救 却将死於自己寒冷的樵夫... 樵夫愤恨的咒骂她忘恩负义... 雪女落下四百年来的第一滴泪...心中喊着： 「如果说我想爱你... 你会相信吗?」 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.110.200.124