※ 引述《[email protected] (成长)》之铭言： > 我有一个clone 是接在puc18上 > 所以要抽取此plasmid 就要大量的养菌 > 但是养菌只能一管一管的养 > 也就是说 如果我要很大量的此clone > 我就要养很多管的菌 > 请问有什麽方法可以更快速且更大量的使菌生长抽plasmid > 我有想过把养菌的LBA量加倍 > 但是长出来的菌没有变多 > 是因为时间不够久吗??(overnight) > 还是因为细菌生长曲线的限制呢??? > 谢谢!!!!!!!!!!!! 我很想丢一个 RTFM （Read the FUCKING manual) 了事啦... 不过人老了也变得比较温良恭俭让 还是来回答一下好勒 首先，还是诚心而无限娇羞的说声 RTFM 拿一本 Qiagen 的 Mini Midi Maxi Mega 的四神合体手册来仔细研读 没有的话自己去 Qiagen 的网站上 download 我说仔细研读喔 不要手册一拿来就翻到 Maxi 那一页准备开始作 前面教你怎麽因应 plasmid, 菌种, culture media 的部分才是重点 还有前面发问的头两句话逻辑就不通 "你的clone 接在 puk18 上面" 这绝对不是 "抽 plasmid 就要大量养菌" 的理由 决定你是否要大量养菌的因素是 1. 你要多少 plasmid? -->这个问题要问施主您自己 2. 你的 plasmid 的 copy number 是多少？ -->puc18 很高了，所以这点应该不是问题 3. 你用的什麽菌种？ -->E.coli. 百百种，你的是哪种 strain? 这种菌种生长速度如何？是否含有 endonuclease? 4. 你用的什麽 culture media? -->LB 各家的配方可能有一些差异 另外还有所谓的 rich media 要考虑的就更多了 5. 你抽 plasmid 的效率好不好？ -->不是说抽不到 tip 的 full capacity 就只要增加菌量就好 如果是你抽 plasmid 技术的问题，增加菌量不会有帮助 --- 根据 Qiagen 的手册 抽一个 high copy number （例如 puc18）的 Maxi 的养菌流程如下： 1. 先养一个 2-5 ml 的小 starter culture 养八小时 （个人建议早上一到实验室就可以开始养） 2. 拿一个 500 ml 以上的锥形瓶 放 100 ml LB, 加入 100 - 200 ul starter culture 养十二到十六小时 （这一步可以傍晚回家前作，第二天早上来刚好十六小时 哦对了如果你没有用锥形瓶养过菌，记得瓶口要用铝箔之类的东西轻轻盖上） 3. 把菌离心下来。总菌量，湿重大约 "零点三克" 就够，多则无益。 -- PTT 的推文站外看不到 本文来自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即时通生物科技相关谘询服务，每小时十五美金，请支付予联合劝募 -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: boblu.STUDENT.CWRU.Edu