作者A65 (嘿嘿~)
看板Biotech
标题Re: [求救]是否有dam-/dcm- orJM110 competent cell.
时间Sat Dec 8 15:55:20 2007
其实未必真的会发生甲基化耶~
因为我也是这个切位
不巧用的E.coli是DH5 alpha
本来还以为驻定失败勒~
没想到还是顺利进行
之後挑出的colony也double check过没有错
不过老实说我也满疑惑怎麽没被甲基化的 @@
※ 引述《countonme (that's just me)》之铭言：
: 请问各位先贤是否有dam-/dcm- competent cell
: 或是JM110 competent cell可以给我？
: 我遇到一个construction问题
: XbaI为dam sensitive，其辨认的位子为T^CTAGA
: 如果此序列後面又是接TC
: RE site中的"A"会被methylation
: T^CTAGA --> T^CTAG(meA)＠A 那麽XbaI就切不动。
: 好死不死我的plasmid中的XbaI site就是 T^CTAGA TC
: 然而XbaI又没有其他的isoshizomers，而且我又一定得用XbaI切。
: 且我的plasmid是用正常的E.coli放大出来。
: 所以只要能被甲基化的位子，一定能被甲基化。
: 所以我想请问各位先贤是否有dam-/dcm- competent cell
: 或是JM110 competent cell可以给我？
: 我在新竹读书，真的很感谢各位的帮忙。
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