※ 引述《[email protected] (olliestrong)》之铭言： > ※ 引述《rick0622 (olliestrong)》之铭言： > : 请问一下 blocking的意思是什麽阿??一直找不到 > 不好意思 我好像没说的很详细 我是想问说SDS-PAGE这个实验里的 > blocking 步骤是什麽意思?? SDS-PAGE 这个实验技术里面不会用到 blocking 我猜你说的是 western blot 这跟 SDS PAGE 虽然经常是连在一起用的技术 但实际上是两件事 而要了解 WB 的 blocking, 要先回想一下 WB 的原理 你有兴趣的蛋白质先 bind 到了 membrane 上的某个位置 然後用 primary Ab 去辨认它 然後用 2nd Ab 去辨认 primary Ab 然後再去侦测 2nd Ab 的特性（酵素活性或是萤光） 现在问题来了 既然你有兴趣的蛋白质可以 bind 到 membrane 上 那你凭什麽认为 你的 primary Ab 只会 bind target protein 而不会也 bind 到 membrane 上？ 同样的，又凭什麽认为 你的 2nd Ab 只会 bind primary Ab 而不会也 bind 到 membrane 上？ blocking 就是为了解决这样的疑虑 因此在加入抗体以前 先把 （应该）已经 bind 上你有兴趣的蛋白质的 membrane 泡到一些乱七八糟的蛋白质里面 例如牛奶, albumin, normal serum 都有人用 这样一来 就算你的 membrane 会无专一性地去乱 bind 蛋白质 在 blocking 之後 这张 membrane 上也已经沾满了乱吸八遭的蛋白质 而不会再去 bind 你的抗体了 --- 不过在时作上 有些 membrane 在 transfer 以後就不会再 bind more protein 了 因此 blocking 可以略过而不会影响结果太多 -- PTT 的推文站外看不到 本文来自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即时通生物科技相关谘询服务，每小时十五美金，请支付予联合劝募，意者来信 -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: cpe-66-61-25-6.neo.res.rr.com