作者bluehttp (虾毁)
看板Biotech
标题[求救] cloning 救郎喔~~
时间Wed Dec 12 01:17:25 2007
最近在做cloning,
做到快发疯了.
我用 XhoI 及 Hind III (biolabs),
去切 insert 和 vector,
跑电泳也确定有切动,
之後用T4 DNA ligase 进行 ligation, 然後overnight,
隔天再transform (DH5a),recovery 1hr,涂plate, overnight.
可是隔天来看没有长.....
我有试过用 fermentas 的 ligase 及 biolabs 的 ligase,
可是一样都没长,
不知道尚有哪些细节我没注意到,
希望有经验的大大可以帮助我阿!
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花这麽多时间作实验 一样 "no data"
林北黑掉了..........凸>"<凸
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◆ From: 123.192.24.108
1F：推 ldy:抗生素的比例是否过高? 12/12 01:21
2F：→ bluehttp:amp 60ug/ml 且我有用没切的plasmid做transform有长 12/12 01:24
3F：推 slowmove:ligation condition? temp? 12/12 12:31
4F：推 littleable:可以试试看ligationn三天...应该就会长几颗了... 12/12 13:34
5F：推 doctorHyde:可以问…transform完的菌液有全部涂完吗？ 12/12 13:44
6F：→ bluehttp:ligation 有试过 16度和室温 12/12 19:52