作者kohigh (习惯)
看板Biotech
标题Re: [求救] cloning 救郎喔~~
时间Thu Dec 13 02:26:47 2007
※ 引述《bluehttp (虾毁)》之铭言：
: ※ 引述《wensing (潜力股)》之铭言：
: : 1. 切的时候 是一起混切？ 还是先後切？
: : 2. 切完後 再经胶体纯化後，DNA sample 是否还在？
: : 3. ligation时，大小片段混合後，加入buffer前是否先45℃加热再冰浴？
: ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
: 这一步是为什麽? 完全不懂
: : 全程是否冰浴操作？有没有再额外加入1mM ATP? 大小片段混合比例是否正确？
: : (po 一下 你的步骤)
: 1.Hind III 及Xho I 一起切, 37度 overnight
: 2.run gel,gel extraction (bioman)
: (在gel extraction後,我有跑电泳,确定DNA还在)
^^^^^^^^^^^^^^
如果有切胶纯化 DNA 尽量不要照UV照太久 如果DNA damage 可能也会影响ligation
: 3.ligation,体积比insert/vector = 7:1
: (我用的ligation buffer本身就含有 1mM ATP)
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◆ From: 140.112.212.239
※ 编辑: kohigh 来自: 140.112.212.239 (12/13 02:28)