作者gwendiline (丹丹)
看板Biotech
标题[求救] 蓝白筛 全都白><
时间Tue Dec 18 21:27:24 2007
先前有问过X-gal的问题
我的老师还是很坚持要我用DMSO
因为DMF 如大家所知
是管制药品
用多少 得纪录多少...
虽然我有上教育训练 可以操作
但 我的老师 还是希望 能用DMSO就用DMSO...><
问题来了..
我已经画了超过50个plate..
每个plate 都长菌
可是全都是白的..(￣__￣；)
X-gal是粉剂 新的
DMSO 有些时日..(从我大学进这实验室就有了 至少四年)
一切操作 都避光
有用锡箔包 操作台也没开日光灯...
因为T/A clony是用Kit
vector ligase等药剂都是算好的量
也因此 我PCR:vector 并没有估量
(没有跑电泳做浓度check)
想请问大家
到现在 全部都是白的><..可能会是什麽问题?
真的很白喔!!
不是浅蓝....
希望有经验的人 能给予点意见
感激不尽!!
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◆ From: 140.120.192.30
1F：推 bluecsky:白不是好事吗?..还是连应该蓝的control都是白的? 12/18 21:38
2F：→ gwendiline:我没做control>< 因为competent cell 只要一溶解 100 12/18 22:08
3F：→ gwendiline:micro全要做完 我觉得很浪费..我也知道这是不对的 12/18 22:09
4F：→ gwendiline:还是有更好的方法吗?>< 我是买益生的competent cell 12/18 22:10
5F：推 blence:请把100ul多分几管做就好了，反正用不着全部涂plate 12/18 22:13
6F：→ blence:我们一管115ul左右，每次分用10~20ul就用的吓吓叫了 12/18 22:17
7F：→ gwendiline:楼上 请问一下唷~ 溶解後分装 可以不失效果吗?? 12/18 22:23
8F：推 cometrise:顺便请问一个问题,competent cell要跟哪一家买 12/18 22:24
9F：→ cometrise:比较好呢?请大家推荐一下,Heat shock用的,谢谢 12/18 22:24
10F：推 yucmbuu:如果是益生的competent cell理论上可以回溶好几次不会影响 12/18 22:28
11F：推 borhen:competent cell不是可以自己做 12/18 22:32
12F：→ yucmbuu:效率, 没忘了加IPTG吧?X-gal与IPTG浓度有没有算错?可以将 12/18 22:32
13F：→ yucmbuu:plate放在4C冰箱,beta-glactosidase会继续反应,颜色会变深 12/18 22:35
14F：→ yucmbuu:但是colony不会变大.理论上不太可能都是白色菌落,之前曾发 12/18 22:36
15F：→ yucmbuu:生益生的competent cell本身就具有抗药性,可以测试一下. 12/18 22:38
16F：推 bluecsky:IPTG X-gal都有加而且浓度没错的话 12/18 23:43
17F：→ bluecsky:收plate後先放4度约一个小时..表现就应该很明显了 12/18 23:43
18F：→ bluecsky:你应该做一些control看是不是真的跑不出蓝色 12/18 23:44
19F：→ bluecsky:还有这种comercial的competent cell可以分装的 12/18 23:44
20F：→ bluecsky:我得确有几次做的结果是完全没蓝色..运气好吧 12/18 23:45
21F：→ bluecsky:但是colony也不多就是了 12/18 23:45
22F：→ gwendiline:IPTG等药剂 浓度都没错 放过4度了 仍然是白色..@@ 12/18 23:56
23F：→ gwendiline:另外感谢各位的经验~也谢谢Y大告诉我益生可回溶的资讯 12/19 00:00
24F：推 oyjn:你白色菌落後来有抽出plasmid吗? 12/19 18:53