作者tsubasawolfy (悠久の翼)
看板Biotech
标题Re: [闲聊] 关於PCR的一个步骤
时间Wed Dec 19 09:36:19 2007
※ 引述《leondemon (狗狗)》之铭言：
: PCR反应的热循环之後
: 通常会在4度C之前 再加一个72度C 7分钟
: 请问这个用意何在呢？？ 我一直无法理解....
: 大学时听过不同老师的两个说法：
: 1.为了使Taq失活，因为加热过久耐热的Taq一样会失去活性
: 2.为了使最後一个循环合成完全
: 大部分都听到第二种说法，但实际上两种说法我都难以接受
: 因此想问问看是否有paper解释PCR中 加上此步骤的真正理由为何？
: 或是大家有听到何种说法？
Molecular cloning写了一个好玩的说法
For the last cycle of PCR, many investigators use an extension time that
is three times longer than in the previous cycle, ostensibly to allow
completion of all amplified product. However, in our experience, the result
of PCR in not significantly altered by thinkering with the extension time
in this way.
(Taq polymerase 每分钟约2K bp in 72~78度)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.181
1F：推 leondemon:给个推 感谢～！ 但是还想听听别的说法 :) 12/19 09:44
2F：推 fc01:其实应该要看情况,像我在做STR的PCR,72度要持续半小时以上 12/19 16:00