作者fideleo (fideleo)
看板Biotech
标题Re: [闲聊] 关於PCR的一个步骤
时间Thu Dec 20 10:04:47 2007
※ 引述《leondemon (狗狗)》之铭言：
: PCR反应的热循环之後
: 通常会在4度C之前 再加一个72度C 7分钟
: 请问这个用意何在呢？？ 我一直无法理解....
: 大学时听过不同老师的两个说法：
: 1.为了使Taq失活，因为加热过久耐热的Taq一样会失去活性
: 2.为了使最後一个循环合成完全
: 大部分都听到第二种说法，但实际上两种说法我都难以接受
: 因此想问问看是否有paper解释PCR中 加上此步骤的真正理由为何？
: 或是大家有听到何种说法？
一时之间我想不起来自己是在哪看到的
不过 我所知道的是
多增加那一个步骤
可以更确保你大部份的 PCR product 在其两端 都有 sticky A
如果你的 PCR product 是那种 size 很大的
然後你之後又要拿那个产物进行 TA cloning
增加这个步骤 应该是除了让一些可能为未完成的反应完成
也可以尽可能地让更多的产物的有 sticky A
使更多产物可以进行下一个 TA cloning 的反应
另外 也有一种情况是
如果你有一个 blunt end 的 DNA 片段
你想把它弄到 T-vector 里面
你可以用这一个步骤 在 blunt end 的两端 加上 sticky A
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1F：推 leondemon:给个推~! 12/22 01:04
2F：推 cutebetty:我知道的也是这理由 12/23 03:19
3F：推 yaliu:实验室同学给我理由是要让它做的完全，但是感觉不怎麽通 12/23 15:51
4F：→ yaliu:你的理由，我能接受，蛮有道理的XD 12/23 15:53