※ 引述《silverberry (走不开....)》之铭言： : ※ 引述《Nikio (工作有够忙)》之铭言： : : 我也在做膜蛋白的纯化实验 : : 用的是古早方法....打破细胞後做超高速离心 : : 最後离下来有点透明的就是membrane fraction了 : 我们也是用这种方法~~ : 超高速离心是 120000g 60 min : : 不过有个小问题： : : 就是membrane fraction好像蛮难resuspense的耶 : : 我用的lysis buffer是TBS+1% triton X-100，後来用到2%也有些溶不掉 : : 请问版上有人做过类似实验吗？最後membrane fraction是用哪种东西溶掉的，感恩>< : 不知道你用 lysis buffer resuspension 都让它做用多久?? : 我们家是用 Dodecyl-beta-maltoside(DDM) 或是 Octylglucoside(OG) : (比较常用还是 DDM 因为它的 CMC 比较小~~) : resuspension membrane 以後放在 shaker 上摇 overnight : 隔天再用 50000g 30 min 去除沉淀 : 理论上沉淀就是 lipid 或是一些没有被 suspension 出来的膜蛋白 : 不过我觉得关键还是在於使用的 detergent 的浓度是不是足够了~~ : 然後之前有 sales 知道我们家有在做膜蛋白 然後就推荐我们用 PIERCE 的 kit : http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=06010422 : 可是因为我们家的系统不适用 所以就放弃了 (当然价格也是一个考量啦~) : 和大家分享~~ 不知道是不是合适~~ 就你的case而言可加大萃取体积也可增加萃取效果 至於萃取时所需的detergent的决定完全要看你的後续实验目的常用的是TX100 因为它是较温和的不会造成蛋白变性 如果你只是要做定量实验的话就无须考虑太多具电荷的detergent也可以用而且效果不错 如salkosyl --

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