作者RaelLai (哇哈哈)
看板Biotech
标题请问萃取膜蛋白用的方法
时间Mon Dec 24 18:39:49 2007
有爬过文了,很多都是用超高速离心或是直接买kit
但是我想问的是,如果想要看protein translocation的话
是不是需要先把细胞打孔?(这样後续离心才可以分出nucleus cytosol and membrane)
然後再用RIPA buffer把各个fraction lysis掉
於是我有找paper
有人是用polytron homogeniser(这什麽?我查叫均质机)做预处理然後去做超高速离心
但是实验室并没有那样的设备,请问我可以用sunication的方式去把细胞膜打孔吗?
我尝试做过然後去染发现trypan是可以让dye跑到细胞里面
但是sonic的强度时间不好抓,我怕到时purified出来根本就不纯
所以不知道用什麽方法比较好??
另外sucrose gradient查网站都没有很明确的一个protocol
虽然有人说不好做但是我到是想尝试看看
不知道有没有不错的教学网站呢??(我们实验室目前没人做这方面)
在此先向各位说声谢谢^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.49.5
1F：推 bluecsky:你是说用sonication替代均质机吗? 12/24 19:36
2F：→ bluecsky:很遗憾..我觉得是不行..均质机其实打的没有很大力欧欧 12/24 19:37
3F：→ bluecsky:他就是拿2ml的eppendorff装入小钢球去机器中震动 12/24 19:37
4F：→ bluecsky:与其说震动其实也只是让小钢球在管中碰撞把sample打烂 12/24 19:38
5F：→ bluecsky:所以要取代的话...不如你自己去磨反而应该差不多才对.. 12/24 19:38
6F：→ bluecsky:我説的是我看过的均质机啦..应该有各种不同的 12/24 19:40
7F：→ bluecsky:不过我想他打的力道都没有sonicator这麽强吧.. 12/24 19:40
8F：推 terp:我记得有人有用针筒打 约26号针筒 来回抽吸破细胞 12/25 00:35
9F：推 zoom8080:反覆冷冻解冻也可以打破~~ 12/25 01:48