作者yingchi (脑残无极限)
看板Biotech
标题[求救]IHC的background消不掉
时间Thu Dec 27 17:12:27 2007
小弟目前正在做一些石蜡切片的IHC，
所使用的是VECTASTAIN 的ABC kit，以及利用DAB呈色
染完之後，再利用Hematoxyline做细胞核的染色，
现在主要有两个问题：
(1)经过DAB呈色後，整个组织都会呈现红褐色，显微镜下，也看不太到明显特别黑的区域
我呈色时间只用一分钟。
(2)利用hematoxyline染色，却染不出细胞核，而整个组织颜色用肉眼看也与DAB染色後
没有差距，理论上不是应该要变成蓝色吗？
在此，想请问有经验的前辈，
我看过期刊里面的IHC，他们所贴出的照片，Background似乎都会呈现蓝色，
但是我现在却做不太出来，反而是整个组织呈现红褐色，
我也试过用commercial的blocking buffer，
仍然无法解决这样的问题，
还请各位指教
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.11
1F：推 oopa:如果方便可以提供你是用哪种组织及blocking的条件,会比较 12/27 18:44
2F：→ oopa:容易找问题,或许有些人有类似的经验 12/27 18:45
3F：推 oopa:background可能来自组织本身的biotin,此时就要从blocking着手 12/27 18:47
4F：推 everything47:你的组织本身就有颜色吗? 会不会是过染了? 12/27 19:34
5F：→ everything47:如果是过染 把一抗的比例调低试试 12/27 19:35
6F：推 roddic:你有做antigen unmasking吗? 12/28 10:42
7F：推 lanth:用citric acid unmasking後background会较高 可以调高 01/02 17:12
8F：→ lanth:blocking serum的浓度 以及blocking的时间 01/02 17:12
9F：→ lanth:另外固定的时间不可以过长(>24hr)否则会让该出来的出不来 01/02 17:14
10F：推 lanth:还有antigen unmasking的方法有好几种 要参考一下抗体的 01/02 17:18
11F：→ lanth:data sheet 选用最适合的方法 01/02 17:19
12F：推 lanth:Hematoxylin 也有许多种 以前我适用Mayer's hematoxylin 01/02 17:23