作者bluecsky (我要蓝蓝淡淡的天空)
看板Biotech
标题[求救] Ni-NTA纯化His-tag fusion protein的问题
时间Thu Dec 27 20:06:09 2007
我是买Qiagen的Ni-NTA的resin来纯化
用Batch purification
使用的wash buffer有三个
分别含有20 50 80 mM的Imidazole
每次都洗4倍column体积的量
现在的问题是在於..
我纯化完後取一点来跑PAGE
发现最後的elution fraction的protein
还是没有我想像中的纯..就是除了主要的band以外在上下还有一些小杂band
不过杂band没有很明显..但是还是看得出有band
请问我要怎麽增进我纯化的纯度呢?..
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上帝曾经说过 :
当一个人打你右脸的时候
你就要用
日耳曼背桥摔坏它的左脸
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.56.129
1F：推 aggaci:减少resin的量 12/27 22:43
2F：推 liuse:很正常.....用His-tag系统纯化会比较脏一点点 12/27 23:07
3F：推 wensing:请教一楼... 为什麽？ 12/28 13:46
4F：推 simonmiho:一楼的目的是想让resin saturation..这样的话杂band减少 12/29 23:12
5F：→ simonmiho:且Qiagen的NI-NTA我记得1 c.c有十个mg以上的binding量 12/29 23:13
6F：→ simonmiho:应该对吧...aggaci学长?? ^_^ 12/29 23:14