※ 引述《doskoi (doskoi)》之铭言： : 最近要做apoptosis : 老板想看DNA fragmentation : 可是却做不出来 : 先说说我的作法 : 为了先试试技术可不可行 : 我利用3mM的H2O2去treat SKBR3 cell : 6个小时後收cell抽DNA : 跑2% agarose gel : 却只能看到well下方一大团DNA,没办法看到ladder : 是我treatment的方法有问题吗? : 还是抽DNA出问题? 我详述一下我抽DNA的方法 大家看看有没有问题 1.收cell後加入lysis buffer (10mM EDTA, 50mM Tris-HCl, 0.5% sarkosyl, ph=8) 2.lyse後加入proteinase K (final 1mg/ml),56度3hr 3.加入RNAse A (final 1mg/ml),56度1hr 4.之後加入两倍体积的phenol/chloroform/IAA(25:24:1),混合後静置30分钟 5.在4度c以12000g离心15分钟 6.取上清液加入3倍体积的无水酒精和1/10的sodium acetate,静置-20度30分钟 7.以12000g离心15分钟,移除上清液後用75%酒精wash pellet 8.再一次12000g离心15分钟,移除上清液後将pellet乾燥 9.再以TE buffer如解pellet後就测浓度跑胶了 这算是传统方法了吧 这样抽不到吗? 我看paper方法都很类似 还有更好的方法吗? kit除外,因为没钱ORZ --

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