就个人的经验而言： 在试新条件时，我都会同时作一片negative control 此negative control的定义是，利用相邻的切片(或位置尽量不要差太远)， 不加一抗(只用diluent)，或加与一抗相同来源的IgG取代一抗进行incubation 其余步骤均与原定的步骤相同(包括IgG的稀释比例,ABC,二抗呈色...等) 这个control的染色结果，可以让我大概抓到非一抗本身导致的背景问题 我不晓得原po目前是否有类似的control做比较? 个人认为多设计control实验对改善IHC结果颇有帮助^^ 之前提到biotin的问题， 是源自使用ABC方法 因为动物组织中也会有内生性的biotin等， 尤以某些组织更明显，我听到比较多的像是肾脏,肝脏或肠道 至於你所用的心脏组织我就不清楚了， 如果最後发现可能是biotin-avidin的问题， 那biotin avidin的blocking就不可或缺了 针对这种状况，目前有多种厂商贩售ready-to-use blocking reagent 你可以再查询看看 另外,如果怀疑的问题出自一抗造成讯号过强 我目前想到的处理方法可能有以下两种: 1.不变一抗稀释比例,而直接除去ABC这个方法,改使用HRP二抗, (当然biotin avidin blocking就不用了)然後直接呈色 2.减低一抗浓度,其余步骤不变 如果试出来效果差异不大,我往後会使用方法2,因为可以省一抗^^", 但如果希望省时间,我往後会用方法1(虽然省下时间也不多啦^^") 希望以上心得能提供你参考用 也希望大家能多多给意见喽! 希望板上能多一点对IHC的讨论 IHC是很有趣的实验方法^__^ --

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