※ 引述《reteporeh (台风也喜欢放假)》之铭言： : 想请问板上的各位 : 有将PCR产物做胶回收然後再进行PCR吗? : 目前遇到的情形是 : 胶回收完的产物再进行相同条件PCR时 : 在跑胶确认时,没有看到任何的band : 重复做过几次,情形依然 : 想请问在做完胶回收後 : 再进行PCR时 : 有什麽条件特别要求的吗? : PS..胶回收是使用Kit做的 sorry... 我的意思是为什麽要在PCR完之後跑胶回收"再跑一次PCR"... (胶体回收也要看的到产物在哪里吧?纯粹猜测位置再切胶回收要是没产物不就做白工?) 假使你的primer设计得够专一的话... 单纯考虑扩增量不够... 将你的PCR产物稀释50倍之後再以同一组primer进行PCR扩增... (甚至是使用更专一的Nest primer扩增) 就能将你第一次没被放大到可见程度的产物再放大一次... 一直持续到你所要的产物被放大到你要的量... 假设是扩增要进行ligation的片段... 那你的RE切位一定设计在primer上... (此句修正,要外加切位才是在primer上) 在没有产物的情形下,为何不先考虑PCR是否成功? 再假设你进行了PCR扩增ligation的片段... 你得到了产物,你将产物以RE切过了 跑了胶回收完,你想要确认回收到的是不是你要的片段... 因此以相同的primer又跑了PCR想说要是同样的东西应该有东西会P出来... 可是你的template上primer相对应的黏接位置已经被你用RE切掉了... 那你怎麽能够预期PCR能够P出东西来呢? --

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