作者biolenz (lenz)
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标题Re: [求救]配制lysis buffer 相关问题
时间Mon Jan 7 12:30:56 2008
※ 引述《hongdow (红豆)》之铭言：
: 各位前辈好...
: 小弟第一次要自己配溶液.
: 诸多地方不是很懂..
: 而目前遇到一个问题是..
: 配方中 有一个成分是PMSF(Phenylmethylsulfonyl fluoride)
这是 protease inhibitor
板友有提到，Roche 的药丸似乎比较稳定，而且是多种
inhibitor 的配方。有点贵就是了。
如果实验室只有 PMSF 那也无所谓啦。那就现配吧。
: 但我的参考资料有提到此成分在水溶液中极不稳定,半生期只有30分钟
: 但算一算,在步骤刮下细胞,溶解细胞,反应,就快超过30分钟,而且我们实验室买的
: BCA kit也要反应2小时,那这样PMSF是不是就失去它的功用啦....那该如何解决勒??
前面说了，PMSF 是要防止你萃取出来的蛋白质被降解用的。
你测蛋白质不会把所有溶液都拿去测吧 = =
其他冰在冰上没那麽容易坏。
我的经验是加 protease inhibitor 在破细胞那一刹那是比较重要。
之後影响相对较小，存一下下也无不可，当然不同的样本特性不同。
: 希望前辈多给一些建议.....THX^^
其实这里有个小问题，就是，别人写的不要尽信。
如果有时间，实验室经费又允许，样本也不会太珍贵的话。
(好像太多前提)
自己试试看到底多久会没效不也蛮好的。
每个时间点收一点来跑胶，看哪时候真的会 smear (蛋白质被分解)。
说不定用你的细胞，你的系统，PMSF 没那麽不稳定呢？
实验的东西没人说得准，自己做最实在。
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◆ From: 140.127.160.142
1F：推 hongdow:那我还有个问题想请问B大,因为实验室使用的BCA kitv需要 01/07 18:14
2F：→ hongdow:需要在37度下反应2小时,我们不是使用跑胶的方法> < 01/07 18:16