作者maoneko (mao)
看板Biotech
标题[求救] DNA isolation by Trizol
时间Wed Jan 9 14:24:56 2008
我最近开始用trizol抽DNA ，
之前完全没有试过，
按照别人给的protocol操作,
结果最後测OD时有一管为0，没有DNA
一管为0.9mg/ml,但260/280=0.3, DNA浓度很低且不够pure
请各位有经验的人帮我看一下是出了啥问题？
~~谢谢大家~~
我的protocol如下
1. cell pellet + Trizol 1 ml, vortex
2. 55度C, 10 mins
3. add 200 ul Chloroform, vortex
4. 静置5 mins
5. spin 1200 rpm, 15 mins, 4度C
6. 移除上清液, 取出中间层白色部份DNA
7. add 300 ul 100% ethanol, vortex, 静置3 mins
8. spin 12000 rpm, 5 mins, 4度C
9. add 1 ml 0.1M Sodium Citrate in 10% ethanol
室温上下翻转30 mins
10. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C
11. 移除上清液，重复9.10步骤
12. add 1 ml 75% ethanol,室温上下翻转10 mins
13. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C, 移除上清液
14. air dry 5 mins
15. add 50 ul TE buffer, 65度C 30 mins,
加热过程中vortex数次
16. 测OD
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.134.146
1F：推 linlin711006:你确定是中间层吗 ? @@ 01/09 14:51
2F：推 grandia:我记得是中间层没错 这部份可以继续分出DNA and protein 01/09 15:23
3F：推 wea:照他的protocol看来 不需把中间层取出 直接加100%酒精即可 01/09 16:02
4F：推 sGoat:你第6步有问题应该不是中间层,而是转置上清液吧... 01/09 16:08
5F：推 sGoat:还有chloroform离心完,中间那一层是蛋白跟细胞碎片... 01/09 16:14
6F：→ sGoat:建议去找一下官方protocal... 01/09 16:16
7F：推 b1ackie:第六步我觉得是取出上清液，网路上再check一下吧 01/09 16:18
8F：推 wea:第六步上清液是分RNA用 剩下的有机层可分DNA及Protein 01/09 16:29
9F：→ wea:之後加EtOH 沉淀物是DNA 上清再加isopropanol 沉淀得到蛋白 01/09 16:30
11F：推 naturer:DNA还是用别的方法抽比较好 01/09 22:30
12F：推 nixo:如果你没有同时要RNA，用其他方法会比用Trizol好吧。 01/10 00:02