最近实验室要做免疫组织染色IHC 我所要染的组织是大鼠的大脑，这次要染的是MPO, nfkb 做冷冻切片後用oct包埋~ 我照着实验室之前学长姊所留下来的protocol做 但是一直染不好，有时候会出来有时候不会。 最近更惨，呈色时一点颜色也没有。 请各位大大帮我看一下我的步骤有没有问题 我的染色步骤 1.先用paraformaldehyde固定 5min 2.用pbs wash 3.冰醋酸 5min 4.pbs wash 5.3% H2O2 30min 6.PBS wash 7.serum blocking 30min 8.PBS wash 9.primary anti-body 4度C overnight 10.PBS wash 11.secondary anti-body 1hr 12.PBS wash 13.ABC kit 接着以nickel+DAB 呈色 大至上来说~步骤我是觉得没有什麽问题~因为学长姊染的出来 不过随着学长姊的毕业~这些东西也跟着走了~ 在呈色後，检体上没有颜色让我很慌 一开始是觉得我的细胞打洞没有打好 所以我试着延长冰醋酸的时间(没有稀释)或使用tritonX-100 没有效，接下来我增加的是一抗的浓度、时间都还是没有效 我觉得有可能是因为那只一抗有问题，所以使用一只NeuN同时进行染色 (染神经细胞来确定我的染色有没有问题) 染出来之前neun的效果还不错，但是现在连neun都不是很明显 二抗的物种我可以确定我没有用错，我现在不知道还有什麽方法可以试 怎麽让我的染色品质更稳定，整片没有颜色我是该说我洗的太乾净了吗? 试了很久都没有什麽起色... 请问我现在还有什麽方法去看我哪里出问题?或是各位有什麽建议~感谢~ --

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